Диагностические преимущества тест-системы «ДИ-ИФА-HBsAg-0, 01» для выявления поверхностного антигена вируса гепатита В

Главная / Новости / Диагностические преимущества тест-системы «ДИ-ИФА-HBsAg-0,01» для выявления поверхностного антигена вируса гепатита В

Поверхностный антиген вируса гепатита В – HBsAg является основным маркером заболевания, нередко регистрируемым задолго до возникновения клинических признаков болезни. Современные методы выявления HBsAg позволяют обнаруживать его в чрезвычайно низких концентрациях. Согласно приказу Минздрава РФ №322 от 2002 г. для тест-систем иммуноферментного анализа (ИФА) для выявления HBsAg с 2003 г. регламентируется диагностическая чувствительность не менее 0,1 МЕ/мл. Однако в отдельных случаях концентрация HBsAg в сыворотке или плазме крови может быть ниже предела чувствительности большинства используемых тест-систем, разрешенных к применению и имеющих диагностическую чувствительность 0,1 МЕ/мл: 1) в инкубационном периоде до начала клинических проявлений заболевания и перед исчезновением HBsAg из крови; 2) в случае скрытой инфекции, так называемого оккультного гепатита, при котором не выявляются никакие маркеры вируса, но присутствует вирусная ДНК; другим вариантом скрытой инфекции может быть отсутствие детектируемых концентраций HBsAg при наличии антител к HBsAg; 3) при формировании мутаций в вирусном геноме, вызывающих изменение структуры антигенных эпитопов HBsAg или биологических свойств вируса, например снижение секреции вируса из клеток; при изменении антигенной структуры снижается «узнаваемость» HBsAg с помощью сертифицированных диагностических тестов, и следовательно требуется большая его концентрация для детекции ; 4) при коинфекции вирусами гепатитов В и С или гепатита В и ВИЧ в результате подавления репликации вируса гепатита В другими вирусами.

Случаи возникновения посттрансфузионного гепатита В в результате использования «серонегативной» по HBsAg крови свидетельствуют о необходимости дальнейших работ по созданию и внедрению в практическое здравоохранение методов детекции антигена, обладающих высокой аналитической и диагностической чувствительностью с сохранением высокой диагностической специфичности.

Цель настоящей работы – оценка иммуноферментной тест-системы, предназначенной для выявления или подтверждения поверхностного антигена вируса гепатита В в сыворотке (плазме) и препаратах крови (альбумине, фибринолизине, иммуноглобулинах и лейкоцитарном интерфероне) с чувствительностью 0,01 МЕ/мл.

Проведена оценка новой высокочувствительной тест-системы для выявления поверхностного антигена вируса гепатита В «ДС-ИФА-HBsAg-0,01» (Приоритетная справка №2006129019 от 10. 08.2006). Оценку чувствительности теста проводили с использованием отраслевого, стандартного образца ОСО-HBsAg 42-28-311-06П, образцов панелей «Boston Biomedica Inc.» (Вест Бриджуотер, Массачусетс, США) и «ZeptoMetrix Corp.» (Буффало, Нью-Йорк, США). Полученные данные показали, что «ДС-ИФА-HВsAg-0,01» выявляет различные субтипы HBsAg с одинаковой эффективностью и на более раннем сроке сероконверсии относительно тестов сравнения. Наряду с высокой аналитической и диагностической чувствительностью система характеризуется высокой диагностической специфичностью. (См. статью: Егорова Н.И. с соавт. “Диагностические преимущества тест-системы «ДС-ИФА-HВsAg-0,01» для выявления поверхностного антигена вируса гепатита В” ).

"Вопр. вирусол.". 2009, № 2, с. 44 - 47.

• Лабораторная диагностика гонореи
• Современная лабораторная диагностика туберкулёза легких
• Культуральная диагностика микоплазмоза и уреаплазмоза
• Антибиотики для лечения уреаплазмоза и микоплазмоза
• Хромогенные питательные среды
• Лабораторные методы диагностики урогенитального трихомониаза (обзор литературы)

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий

Поиск по сайту

Медицина О ПРИМЕНЕНИИ В ПРАКТИКЕ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ ИММУНОФЕРМЕНТНЫХ ТЕСТ-СИСТЕМ -Здоровье

О ПРИМЕНЕНИИ В ПРАКТИКЕ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ ИММУНОФЕРМЕНТНЫХ

ТЕСТ - СИСТЕМ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ПОВЕРХНОСТНОГО АНТИГЕНА ВИРУСА

ГЕПАТИТА В (HBsAg) И АНТИТЕЛ К ВИРУСУ ГЕПАТИТА С (анти-ВГС) В

СЫВОРОТКЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА

В целях принятия дополнительных мер по предотвращению распространения гепатитов В и С и улучшению качества иммунобиологических препаратов, предназначенных для лабораторной диагностики вирусных гепатитов В и С с 28 марта по 1 июня 2000 года были проведены сравнительные испытания диагностических иммуноферментных тест - систем для выявления поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg) и антител к вирусу гепатита С (анти-ВГС) в сыворотке крови человека.

По результатам испытаний установлено, что за период прошедший со времени проведения предыдущих сравнительных испытаний, качество отечественных диагностических тест систем значительно улучшилось, их чувствительность повысилась в 2 раза. Более того, анализ результатов испытаний выявил потенциальные возможности отечественных производителей на современном этапе развития технологии производства тест - систем для диагностики HBsAg и анти-ВГС обеспечить их еще более высокую чувствительность и специфичность.

Эпидемическая обстановка, сложившаяся в Российской Федерации по вирусным парентеральным гепатитам, диктует необходимость дальнейшего повышения чувствительности и специфичности таких диагностических тест - систем.

На основании заключения комиссии по организации и проведению сравнительных испытаний тест - систем для выявления поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg) и антител к вирусу гепатита С (анти-ВГС) в сыворотке крови человека, в целях принятия дополнительных мер по предотвращению распространения вируса гепатита В и С при переливании крови и ее компонентов, трансплантации органов и тканей, а также повышения качества лабораторной диагностики вирусных гепатитов В и С.

1. Руководителям органов управления здравоохранением субъектов Российской Федерации:

1.1. Обеспечить проведение обследования доноров крови, органов и тканей человека, больных острыми и хроническими гепатитами на наличие HBsAg и анти-ВГС с помощью тест - систем, указанных в приложениях 1 и 4. При выборе тест - систем для выявления HBsAg отдавать преимущество диагностическим препаратам с более высокой заявляемой чувствительностью.

1.2. Запретить с 1 января 2002 года применение тест - систем для выявления HBsAg, с чувствительностью ниже 0,25 нг/мл.

1.3. В случае установления фактов поставки тест - систем для выявления HBsAg и анти-ВГС неудовлетворительного качества, а также несоблюдения условий их транспортировки и хранения, направлять информацию в Департамент госсанэпиднадзора Минздрава России и ГИСК им. Л.А. Тарасевича.

1.4. Использовать для проведения анализа по подтверждению наличия HBsAg и анти-ВГС конфирматорные тест - системы (приложения 3 и 5). Постановка окончательного лабораторного диагноза без подтверждения в одном из конфирматорных тестов запрещается.

1.5. Исключить использование диагностических иммуноферментных тест - систем для выявления HBsAg и анти-ВГС, не имеющих разрешение Минздрава России на применение.

2. Главным врачам Центров госсанэпиднадзора в субъектах Российской Федерации:

2.1. Обеспечить действенный контроль за использованием на местах тест - систем для выявления HBsAg и анти-ВГС в соответствии с настоящим приказом.

2.2. В случае использования для диагностики HBsAg и анти-ВГС тест - систем, не разрешенных Минздравом России, принимать срочные меры по их запрещению. О каждом выявленном случае немедленно информировать Департамент госсанэпиднадзора Минздрава России.

2.3. Обеспечить постоянный контроль за транспортировкой и хранением тест - систем для диагностики HBsAg и анти-ВГС в соответствии с инструкциями по применению и требованиями санитарных правил СП 3.3.2.028-95 "Условия транспортировки и хранения медицинских иммунобиологических препаратов".

3. Департаменту госсанэпиднадзора Минздрава России организовать и провести следующие сравнительные испытания в 1 квартале 2002 года.

4. Государственному НИИ стандартизации и контроля медицинских иммунобиологических препаратов им. Л.А. Тарасевича:

4.1. Завершить в первом квартале 2001 года подготовку и аттестацию панелей сывороток крови, содержащих HBsAg в различных концентрациях с учетом его субтиповой принадлежности (субтип "ad" и "аy"). При подготовке и аттестации новых серий панелей сывороток крови, содержащих антитела к ВГС, руководствоваться результатами генотипирования сывороток и данными о распространенности различных генотипов ВГС на территории Российской Федерации.

4.2. Обеспечить проведение выборочного предреализационного контроля тест - систем для диагностики вирусных гепатитов В и С.

4.3. Внедрить в лабораторную практику для оценки чувствительности тест - систем по выявлению HBsAg Отраслевой стандартный образец HBsAg вируса гепатита В - ОСО 42-28-311-00.

5. Контроль за выполнением настоящего приказа возложить на Первого заместителя Министра Г.Г.Онищенко.

Что значит HbsAg и о чем говорят положительный и отрицательный результаты анализа на антиген?

маркер наличия и репликации HBV

Вышеуказанные маркёры появляются и исчезают в определенной последовательности в соответствии с этапами прохождения заболевания. Некоторые из них, такие как IgG анти-НВс, остаются на всю жизнь. Полную и достоверную диагностическую картину дает только весь набор маркёров. Кроме того, для острого, хронического, фульминантного и смешанного гепатитов существуют свои серологические профили (об этом ниже).

Нельзя не затронуть такое редкое, но чрезвычайно опасное явление, как параллельное инфицирование гепатитом D (HDV), оно может возникнуть в двух вариантах:

1. Коинфекция. то есть одновременное заражение вирусами гепатита B и D (дельта), которое ведет к значительно более тяжелой форме заболевания, но почти не переходит в хроническую форму иногда из-за того, что высока вероятность летального исхода.
2. Суперинфекция. то есть присоединение HDV к ранее «спавшему» HBV в виде острой тяжелой формы или как обострение хронической формы гепатита B. В последнем случае, после подавления он также переходит в хроническую форму с прогнозом цирроза или рака печени.

HDV – это своеобразный паразит вируса гепатита B, его сателлит, он не может реплицироваться в отсутствие HBV. поскольку синтез белков его внешней оболочки невозможен без наличия в гепатоцитах вируса гепатита B. Таким образом, переболеть гепатитом B можно и без дельта-инфекции, а вот наоборот не получится. Присоединение HDV вызывает в 30% случаев молниеносный (фульминантный) гепатит с развитием острой печеночной недостаточности и печеночной энцефалопатии, которые нарастают стремительно, в 60% случаев приводя к летальному исходу. Однако общий исход гепатита B в фульминантную форму находится в пределах 0,4–1% случаев. Поэтому при положительном результате на антиген HBsAg в обязательном порядке следует проводить диагностику дельта-инфекции. Для этого используются серологические маркеры:

антитела класса М к вирусу гепатита D

маркируют репликацию HDV в организме

антитела класса G к вирусу гепатита D

свидетельствуют о возможной инфицированности HDV или перенесенной инфекции

антиген вируса гепатита D

маркер наличия HDV в организме

РНК вируса гепатита D

маркер наличия и репликации HDV

Анализ может быть сдан любым желающим, но есть определенные категории лиц, у которых подобное тестирование проводится обязательно:

• сотрудники медицинских учреждений, в особенности те, которые работают с кровью пациентов: медицинские сестры манипуляционных кабинетов, гинекологи, хирурги, фельдшеры, стоматологи;
• лица с повышенным уровнем ферментов АсАт и АлАт;
• больные, которым предстоит хирургическое вмешательство;
• потенциальные доноры крови;
• лица, являющиеся носителями вируса гепатита B, больные с хронической формой данного заболевания;
• беременные женщины.

Кроме того, исследование рекомендуется делать при наличии таких симптомов, как тошнота, рвота, потеря аппетита, изменение цвета мочи и кала, желтушность – то есть всех тех признаков гепатита B, которые были описаны в начале статьи. Но в целом каждый человек, если подходит к своему здоровью ответственно, должен делать серологическое исследование на HBsAg один раз в год.

Сегодня существует уже три поколения методов серологической диагностики HBsAg. и самые информативные и чувствительные из них, способные выявлять концентрации до 0,05 нг/мл, постепенно вытеснили своих предшественников.

Реакция преципитации в геле, РПГ (Gel precipitation test)

Встречный иммуноэлектрофорез, ВИЭФ (Counter immunoelectrophoresis),

Реакция связывания комплемента, РСК (Complement fixation test)

Реакция латекс-агглютинации, РЛА (Latex agglutination test)

Метод флюоресцирующих антител, МФА (Immunofluorescence)

Иммуноэлектронная микроскопия, ИЭМ (Immune electron microscopy)

Реакция обратной пассивной гемагглютинации, РНГА (Indirect hemagglutination test)

Радиоиммунный анализ, РИА (Radioimmunoassay)

Иммуноферментный анализ, ИФА (Enzyme immunoassay)

Почему ИФА и РИА более информативны в сравнении с предшественниками? Дело в том, что они способны выявлять IgM и IgG по отдельности, что позволяет делать определенные выводы о динамике инфекционного процесса или о состоянии реконвалесценции.

Кроме изложенных выше методов иммунологических исследований на антигены HBsAg, HBеAg и антитела Anti-HBс классов IgM и IgG, Anti-HBе, Anti-HBs. важным тестом является диагностика сыворотки крови на ДНК вируса гепатита B. Такой тест проводится методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с определением в режиме «реального времени» не только качественных результатов в формате «есть-нет», но и количественного содержания копий ДНК вируса гепатита В, если он обнаружен.

Качественные и количественные варианты ДНК-зондирования методом ПЦР имеют 100% точность и могут использоваться на самых ранних сроках после заражения. С помощью ПЦР выявляют персистирующие вирусы, которые находятся в клетке, продолжающей выполнять свои функции, а потому они с трудом обнаруживаются или не обнаруживаются другими методами.

Подобную диагностику можно проводить уже через 1–3 недели с момента предполагаемого заражения. Для такого тестирования используется венозная кровь (5–10 мл), которая берется натощак. Для получения ответа требуется один день.

НВsAg -качественный тест указывает лишь на наличие либо отсутствие заболевания. Очевидно, что отрицательный результат означает отсутствие заболевания, а положительный – наличие патологии. Последнее также может свидетельствовать о ранее перенесенном заболевании или носительстве. Любые сомнения подобного рода снимаются проведением количественного исследования на определение HBV-DNA методом ПЦР. Таблицы с трактовками маркеров острого и хронического гепатита B мы приводим ниже:

Иногда при определении показателя НВsAg серологическими методами может быть получен ложноположительный ответ. Порой причиной неправильного результата становятся некачественные реактивы или нарушения в процессе проведения работ, связывание реагента с неспецифическими антигенами. Поэтому всегда при получении положительного результата требуется повторное проведение тестирования.

Кроме того, человеку нужно определить вирусную нагрузку (ДНК-HBV), сдать печеночные пробы (билирубин с фракциями, АлАт, АсАт, ЩФ, ГГТП). Обязательным является посещение инфекциониста, который при необходимости направляет больного на фиброэластометрию, подбирает курс лечения.

Напомним также юридические аспекты. В соответствии с приказом Государственного санитарно-эпидемиологического надзора в г. Москве от 26 мая 2003 г. № 16 и приказом Комитета здравоохранения Правительства Москвы и Центра государственного санитарно-эпидемиологического надзора в г. Москве № 159/64 от 13.04.2000 г. (приложение № 3) сведения о позитивных результатах серологических исследований на маркёры вирусных гепатитов передаются в Отдел учета и регистрации инфекционных заболеваний центра Госсанэпиднадзора. А оттуда эти данные поступают в медицинское учреждение, которое оказывает амбулаторную помощь по месту прописки пациента.

При желании человек может сдать анализ анонимно. В таком случае номер, который присваивается биологическому материалу, известен только ему и медработнику, принимавшему заказ. Но данные анонимных тестов не могут предоставляться для профосмотров, госпитализации.

При проведении адекватного лечения болезни в острой стадии большинство пациентов полностью выздоравливают и приобретают пожизненный иммунитет к данной инфекции. Но если острый период болезни прошел незамеченным, или если у больного снижен иммунитет, то заболевание может перейти в хроническую форму.

Терапия подбирается инфекционистом персонально для каждого пациента, вопрос о госпитализации также решается индивидуально, в зависимости от тяжести состояния. Если человек является носителем вируса, но заболевание не переходит в острую стадию, то лечения не требуется, необходимо только регулярное наблюдение у врача (следует раз в полгода посещать специалиста и проходить обследование). Хронический гепатит В подлежит специальному лечению только при наличии соответствующих показаний.

Бывает и так, что люди получают на руки ложноотрицательный ответ. Это происходит, если забор биоматериала произведен менее чем через 3-4 недели после заражения, у пациента низкие уровни HBsAg или редкие субтипы вируса, инфекция протекает в латентной форме, отсутствует иммунный ответ. Если результат вас не успокоил, лучше сдать биоматериал повторно: горькая правда всегда лучше «сладкого» неведения. Убедитесь в том, что повторные результаты также окажутся отрицательными, и тогда вы вздохнете облегченно.

И даже если поводов для беспокойства пока нет, задайтесь вопросами: не стоит ли именно сейчас задуматься о состоянии здоровья? Провести вакцинацию, чтобы не допустить заражения этой опасной инфекцией в будущем? Одним словом, у вас есть хороший шанс изменить образ жизни в лучшую сторону.

В настоящее время определение данного антигена выполняют многие государственные и частные клиники. Пройти обследование в государственных лабораториях можно, получив соответствующее направление от врача. Диагностика проводится бесплатно, но ее результаты не всегда отличаются точностью, так как нередко тестирование осуществляется на устаревшем оборудовании, с дешевыми реагентами. Конечно, так происходит далеко не везде и не всегда, но, если есть опасения, лучше обратиться в частную лабораторию.

Частные клиники делают анализы на платной основе, но при этом обеспечивают более высокое качество результатов исследования. Кроме того, в подобных учреждениях можно обследоваться без направления от врача и без необходимости долго ожидать своей очереди.

Так, одна из крупнейших в России сетей независимых лабораторий – «ИНВИТРО» – производит более 1000 видов лабораторных исследований на инновационных анализаторах и тест-системах таких авторитетных фирм, как Becton Dickinson, Abbott, DPC, Instrumentation Laboratory (CША), BIO-RAD (Франция), F. Hoffmann-La Roche Ltd. (Швейцария), Olympus и Sysmex Corporation (Япония). Ежедневно по всей России для сдачи анализов в «ИНВИТРО» обращается порядка 19 000 человек, что свидетельствует о высоком доверии к компании. Это подтверждает и тот факт, что результаты исследований признаются всеми медицинскими учреждениями России. Качественный тест на маркёр HBsAg стоит здесь 365 рублей, а результаты вы сможете получить как в распечатанном виде, так и в электронном, в «личном кабинете» на сайте, по предварительной заявке по телефону (при оплате заказа необходимо оставить администратору кодовое слово), по e-mail, по факсу или лично в любом из медицинских офисов. Возможна доставка результатов курьером и даже на английском языке, если вы собираетесь за границу. Важным моментом является программа лояльности, особенно актуальная в том случае, когда повторные анализы необходимо проводить регулярно. Постоянные клиенты могут получать скидки в размере 5 или 10%. В некоторых медицинских офисах оказывается услуга врача-консультанта, который не ставит диагнозы и не назначает лечение, но помогает с интерпретацией результатов и выбором профильного специалиста.

ДС-ИФА-ВИЧ-АГ Тест-система иммуноферментная для выявления

Иногда кажется, что он больше ягненок, чем лев. Несмотря на то что Ламберт все-таки король джунглей, он вырос в очень ласкового и игривого большого кота, который не может заснуть без своего любимого одеяла.

Ламберт, африканский лев, впервые попал в центр помощи диким животным в 2004 году, тогда ему было всего несколько месяцев. Одна семья из Западного Техаса тайно выкупила львенка у браконьеров. Но хозяева быстро осознали, что содержать в доме льва гораздо сложнее, чем обычную кошку. Скоро «домашнего зверя» отдали в центр.

Ламберт очень быстро приспособился. Казалось, что львенок счастлив, но волонтеры чувствовали, что зверю явно чего-то не хватает. Директору центра Вики Кихей однажды пришло в голову, что львенок рос в домашних условиях и часто спал на кровати. Конечно, царское ложе в вольере никто поставить не мог. Поэтому Вики купила Ламберту одеяло. И теперь каждую ночь в течение двух лет лев спит только с ним.